Association of high-risk human papillomavirus with ocular surface squamous neoplasia: a case-control study in Mexico / Asociación del virus del papiloma humano de alto riesgo con la neoplasia escamosa de la superficie ocular: estudio de casos y controles en México

Abstract: Objective: To investigate the association of high-risk human papilloma virus (HR-HPV) and other risk factors with ocular surface squamous cell neoplasia (OSSN). Materials and methods: We obtained DNA from 22 fresh frozen OSSN tissues and 22 pterygia as controls, we used a broad-spectrum HPV DNA amplification short PCR fragment to identify HPV infection in all specimens and then genotyped HPV by a reverse hybridization line probe assay. We also obtained demographic, sun exposure, and tobacco consumption information. Results: HR-HPV frequency was 40.9% in the OSSN group and 4.5% in the pterygia group (p=0.009). After covariate adjustment, OSSN was associated with HR-HPV (OR=16.3, 95%CI=1.2,218.1, p=0.03) and sunburn (OR=10.8, 95%CI=1.8,86.0, p=0.02). Conclusions: Ocular surface squamous cell neoplasia is a multifactorial disease. The strong association between HR-HPV and OSSN, suggests that HR-HPV could play an etiological role in OSSN development.

Resumen: Objetivo: Investigar la asociación del virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR), así como de otros factores, con neoplasia escamosa de la superficie ocular (NESO). Material y métodos: Se obtuvieron 22 especímenes de tejido fresco de NESO y 22 de pterigión como controles; se utilizó una técnica molecular altamente sensible para identificar la infección por VPH en todos los especímenes, así como la genotipificación del VPH. También se obtuvo información demográfica sobre exposición a la luz solar y tabaquismo. Resultados: La frecuencia de infección por VPH-AR fue de 40.9% en el grupo de NESO y de 4.5% en el grupo control (p=0.009). Después de ajustar por covariables, NESO se asoció con el VPH-AR (OR=16.3, IC95%=1.2,218.1, p=0.03) y el eritema solar (OR=10.8, IC95%=1.8,86.0, p=0.02). Conclusiones: La neoplasia escamosa de superficie ocular en una neoplasia multifactorial. Los presentes resultados sugieren que el VPH-AR podría tener un papel etiológico en el desarrollo de NESO.

Factores de riesgo de cáncer cervicouterino invasor en mujeres mexicanas / Risk factors in invasive cervical cancer among Mexican women

OBJETIVOS: Evaluar la asociación entre cáncer cervicouterino (CaCu) invasor y el virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) (carga viral/tipo 16), así como con factores ginecológicos y socioeconómicos. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio de casos y controles pareado individualmente (215 casos con CaCu invasor y 420 controles). La población de estudio se reclutó entre los años 2000 y 2001. Se evaluaron variables tradicionalmente asociadas con CaCu (ginecológicas y socioeconómicas) y dos variables asociadas con la presencia de VPH (carga viral y el tipo 16). La presencia de VPH-AR se determinó mediante Captura de Híbridos II. La carga viral se midió a través de unidades relativas de luz y picogramos por ml (1 RLU=1 pg/ml), divididas en cuatro categorías: negativa (<1 pg/ml), baja carga viral (1-49 pg/ml), carga viral intermedia (50-499 pg/ml) y alta carga viral (>499 pg/ml). El análisis estimó razones de momios (RM) ajustadas a través de modelos de regresión logística condicionada. RESULTADOS: La presencia de VPH-AR incrementa en 78 veces la probabilidad de presentar CaCu invasor; cuando el VPH es tipo 16, el incremento es mayor (RM= 429.7) comparado con otros tipos (RM=64.1). Se observó una tendencia importante en la RM al elevarse la carga viral (RM=46.6 carga baja; RM=250.7 intermedia y RM=612.9 alta). Finalmente, los factores demográficos y obstétricos conocidos, incrementaron la probabilidad de CaCu invasor. No se observó asociación entre CaCu invasor y tabaquismo en la población de estudio. CONCLUSIONES: Este estudio contribuye a la identificación de las mujeres con alto riesgo de desarrollar CaCu invasor, entre las pacientes infectadas con VPH-AR. Por otra parte, confirma la importancia de la infección de VPH-AR y refleja la carga viral del VPH-AR como cofactor y posible promotor en el desarrollo de la enfermedad. Por último, este biomarcador puede contribuir a mejorar la prevención y la detección temprana de esta enfermedad.

Vaccines against human papillomavirus and perspectives for the prevention and control of cervical cancer

Actualmente, las infecciones "persistentes" por algunos tipos del virus del papiloma humano se consideran como necesarias para desarrollar cáncer cervicouterino. Por ello, el desarrollo de vacunas eficientes contra estos virus se ha considerado de suma importancia para poder eventualmente ayudar a controlar esta enfermedad, en países donde los programas de detección oportuna no han dado aún los resultados deseados. En el caso de estos virus no es posible el desarrollo de vacunas tradicionales, las cuales están basadas generalmente en el empleo de virus atenuados o muertos. Esto debido a la falta de sistemas eficientes para producir partículas virales en cantidades suficientes para ser usadas en programas masivos. Sin embargo, de manera afortunada, la expresión de la proteína viral tardía L1, sola o en combinación con la proteína L2, lleva a la generación de estructuras similares a los viriones infectivos y que han sido denominadas "partículas semejantes a virus" o VLP. Estas preparaciones de cápsides vacías han sido probadas ya en diferentes modelos animales, incluidos los humanos. Recientemente, se ha reportado que la las VLP del virus del papiloma humano tipo 16 son capaces de prevenir el desarrollo de las infecciones "persistentes" causadas por algunos tipos del virus del papiloma humano, consideradas precursoras del cáncer cervicouterino.

Virus de papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) y neoplasia intraepitelial cervical (NIC) en mujeres de dos hospitales de la Ciudad de México / High-risk human papilloma virus and cervical intraepithelial neoplasia in women at 2 hospitals in Mexico City

OBJECTIVE: To determine the high risk HPV (HR-HPV) association with Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) in women of two Dysplasia Clinics in Mexico City. MATERIAL AND METHODS: Prolective case-control study was done. Women with and without security affiliation attended in Instituto Mexicano del Seguro Social (Hospital 1) and Hospital General de MÚxico (Hospital 2) were included in the study. Cases were women with histopathologic diagnosis of CIN and controls were women with negative dysplasia in cytologic study (Pap). Information was obtained by direct interview. HR-HPV was determined by Hybrid Capture II assay, in cervical samples. Bivariate and logistic regression analysis was done. RESULTS: One hundred and two cases and 192 controls from Hospital 1 and 89 cases and 66 controls from Hospital 2 were included. 83.3 and 77.3 of women from Hospital 1 and 2 respectively were positive to HR-HPV. The association HR-HPV and CIN in Hospital 1 was ORa = 40.6, C.I. 95 = 17-96.8; while in Hospital 2 there was not association. Age was an effect modifier in the HR-HVP and CIN association, in Hospital 1. It was observed a correlation between viral load and CIN degree. CONCLUSIONS: The HR-HPV infection frequency in controls and CIN I was higher than the reported in other studies. Age was a modifier in the HR-HPV association and CIN. In dysplasia clinics without medical referral system of patients is possible to observe similar risk factors to cervical cancer.

Mutaciones en genes Ha-ras y p53 detectadas mediante PCR-SSCP en lesiones premalignas y malignas de cuello uterino asociadas con virus papiloma humano (HPV) / Ha-ras and p53 gene mutations scanned by PCR-SSCP in premalignant and malignant lesions of the uterine cervix associated with human papillomavirus

El objetivo del estudio fue investigar las frecuencias de virus papiloma humano (HPV) y de mutaciones en los genes Ha-ras y el supresor p53 en tumores y lesiones precursoras de cérvix. Se incluyeron en el estudio 30 carcinomas invasores (CAIN), 36 displasias severas (CIN III) y 12 tejidos normales adyacentes a los tumores (TN). Se realizó la tipificación de HPV y la búsqueda de mutaciones en los genes Ha-ras y p 53 mediante PCR-SSCP. Los CAIN fueron HPV positivos en el 93%; en el 41% se observaron mutaciones en Ha-ras y en el 17% para p53. El 80% de los CIN III fue HPV positivo, en el 18% se detectaron mutaciones en Ha-ras y en el 11% en p53. En los TN el HPV se detectó en el 17% de los casos. Todas las mutaciones fueron heterocigotas. Por otro lado, todas las muestras con mutaciones en Ha-ras resultaron HPV positivas, en cambio el 33% de los casos de p53 mutada fueron HPV negativos. El HPV 16 (44%) fue más prevalente que el HPV 18 (15%); los casos de tipo viral no determinado (18%), indicarían la circulación en nuestro país, de otros tipos distintos a los ensayados (6, 11, 16, 18, 31 y 33), variantes o infecciones mixtas. La baja frecuencia de mutaciones en el gen p53 señala que la inactivación de la proteína normal mediada por HPV tendría un rol más importante en la patogénesis del cáncer. Dado que el Ha-ras mutado se halló en lesiones premalignas, hemos especulado que podría representar un marcador temprano de progresión. Nuestros hallazgos proveen de evidencias adicionales acerca de un efecto interactivo entre los HPV de alto riesgo y de oncogenes en el desarrollo tumoral.

Variantes moleculares de virus papiloma humano (HPV) tipos 16 y 18 en adenocarcinomas de cervix / Molecular variants of human papillomavirus (HPV) types 16 and 18 in adenocarcinomas of the cervix

Los virus Papiloma humano (HPV), en particular los tipos 16 y 18, son considerados carcinógenos humanos, habiéndose demostrado una asociación etiológica entre la infección con estos virus y el desarrollo del cáncer de cuello uterino. El rol viral en el carcinoma escamoso ha sido ampliamente estudiado aunque la información disponible en relación al adenocarcinoma es mucho menor, en parte debido a su baja frecuencia. En este trabajo investigamos la presencia de tipos y variantes intratípicas de HPV en adenocarcinomas de cérvix. Se incluyeron 23 biopsias de archivo, fijadas y embebidas en parafina. La detección y tipificación viral se llevó a cabo mediante PCR genérica y posterior análisis de polimorfismos conformacionales de cadena simple (SSCP). La variabilidad genética se investigó en un fragmento de 450 pb del gen L1, mediante la secuenciación directa post-PCR. Se detectaron 11 muestras positivas para HPV 16 (9 prototipos y 2 variantes: 1 europea y 1 asiática-americana), 10 para HPV 18 (9 prototipos y 1 variante europea), 1 para HPV 31 y 1 negativa. Se confirmó la asociación de HPV de alto riesgo con esta neoplasia, con una alta prevalencia (43%) de HPV 18 pero sin un predominio sobre los demás tipos virales, como fue publicado previamente. La variabilidad demostrada en epítopes de la proteína L1 originaron cambios aminoacídicos que podrían tener implicancias en la repuesta inmune y por lo tanto ser considerados en el diseño de vacunas.

Chronic myelocytic leukemia in accelerated phase with i(17) (q10) and loss p53 gene. Case report

Chronic myelogenous leukemia (CML) is a clonal disorder that presents with a stable period followed by an accelarated phase. The most frequent chromosomal abnormality described is t(9;22). Alterations of chromosome 17, where p53 is located, have been described during transformation. We studied a 23-year-old male who presented with chronic myelogenous leukemia. The karyotype demonstrated 46,XY,t(9;22) (q34;qll) in 12 percent of mitoses and hyperdiploidy in 43 percent. Forty six months later the patient suffered a blast crisis characterized by absolute basophilia; the cytogenetic study demonstrated 48,XY,+8,t(9;22(q34;qll), +der(22)t(9;22)(q34;qll),+i(17)(q10) in 18 percent of the mitoses, 46,XY,t(9;22) (q34;qll) in 34 percent and hyperdiploidy in 23 percent. Since there was i(17)(q10) during this stage, a retrospective DNA study of the biopsy material before and after the transformacition was performed. In the chronic phase, p53 was present in normal amounts, during transformation there was loss of genetic material from the p53 region. The protein product of suppressor gene p53 normally works holding the proliferation of cells. When there is the formation of an isochromosome, genetic material is lost; thus, in this patient, p53 was delted upon the observation of i(17). Lastly, this case shows how DNA can be extracted from slides; this technique is novel and can be used for retrospective studies when parafin block or fresh tissue are not available

Las variantes moleculares de papiloma virus humanos tipo 16,18 y 45 en tumores de cuello uterino, en México / Molecular variants of human papilloma virus types 16,18 and 45 in cervico uterine tumors in Mexico

El cáncer cérvico uterino (CaCU) representa aún la primera causa de mortalidad por neoplasias entre las mujeres mexicanas. La participación de los virus del papiloma humano (HPV) es determinante en el desarrollo del CaCU y en la actualidad sabemos que en más del 90 por ciento de todos los tumores se encuentran secuencias virales activas, principalmente de los tipos 16, 18, 31, 33 y 45. Estudios recientes en distintas partes del mundo han mostrado la existencia de variantes moleculares de los tipos 16 y 18 (HPV-16 y HPV-18). La existencia de estas variantes moleculares ha permitido establecer patrones de dispersión de estos virus durante su evolución, que se considera tan antigua como la del hombre mismo. De esta manera, se han identificado cinco diferentes ramas filogenéticas para el HPV-16 y se ha podido estableces que la diversidad viral se asocia con la etnicidad de las poblaciones. En este trabajo se buscaron secuencias virales en muestras de tumores de la población mexicana y se observó la presencia de variantes de los tipos 16, 18 y 45. Con relación al HPV-16 se encontró una variante en más de la mitad de los tumores con este tipo viral que parecería tener un comportamiento más agresivo que el prototipo. En el caso del HPV-18 se encontraron en cerca de la cuarta parte de las muestras positivas para este tipo viral, dos variantes moleculares que en apariencia presentan un comportamiento biológico diferente. Por último, todas las muestras positivas para el HPV-45 mostraron la presencia de una variante aún no reportada. Algunas de estas variantes se encontraron asociadas con determinadas variedades histológicas de los tumores; lo cual sugiere que algunas de estas variantes presentan un comportamiento específico que influye en el desarrollo, o la agresividad de determinados tipos histológicos del CaCU

La proteína p53 y los oncogenes de papilomavirus humanos en la carcinogénesis del cuello uterino / P53 and human papillomavirus in the carcinogenesis of the uterine cervix

El genoma de algunos papilomavirus humanos (HPV) se encuentra presente en la mayoría de los tumores de cervix. Los productos de los oncogenes virales E6 y E7 inactivan a los productos de los genes supresores p53 y Rb. La proteína p53 controla la progresión de las células del reposo al crecimiento. Los daños al genoma celular elevan los niveles de p53 e inhiben esta progresión. Esto permite la reparación del DNA antes de su duplicación. Las células que pierden este control replican su DNA dañado, lo cual genera inestabilidad genómica. La proteína E6 de los HPV de alto riesgo interacciona con p53 e induce su degración. En las lesiones del cervix, la expresión de los oncogenes E6 y E7 podrían contribuir a la inestabilidad genómicca celular, y permitiría acumular alteraciones que las llevaran al desarrollo tumoral

Different arrangement of human papillomavirus E2 binding sites distinguishes cutaneous types from those associated with mucosal lesions

High-risk-type human papillomavirus DNA sequences are found in a high percentage of carcinomas from the uterine-cervix, with the viral E1-E2 gene region usually disrupted and the E6 and E7 oncoproteins consistently expressed. The E2 protein is known to repress early transcription from genital HPV promoters having a proximal E2 binding site (2BS) close to the TATA box. On the contrary, the E2 protein activates cutaneous early promotes, the E2 protein activates cutaneous early promoters having a longer distance between these sites. Using an in vivo approach we analyzed the regulation, by the BPV-1 E2 protein, of a natural HPV-18 promoter where proximal E2BS were placed at variable positions relative to the TATA box, and of heterologous promoters where E2BS was placed upstream of any other known DNA-binding elements. Our results confirm that the E2 protein represses or activates HPV early gene transcription depending on the distance between the TATA box and the proximal E2BS

Aspectos moleculares de los papilomavirus humanos y su relación con el cáncer cérvico-uterino / Molecular aspects of human papillomaviruses and their relationship to uterine-cervix carcinoma

Los papilomavirus son responsables del desarrollo de lesiones epiteliales benignas y malignas en mamíferos. Más de 60 tipos diferentes de papilomavirus humanos (HPVs) han sido aislados hasta ahora: algunos de ellos participan de manera importante en el desarrollo del cáncer cervical. El DNA de los tipos de 90 por ciento de los carcinomas genitales. La integración del DNA viral en el genoma celular puede ser un paso importante en el desarrollo de la enfermedad. Dos genes tempranos de los HPVs (E6 y E7) están involucrados en la inmortalización celular. Otro gen temprano (E2) participa en el control de la expresión de los oncogenes, al unirse directamente a regiones conservadas del genoma viral como celular, interactúan con la región regulatoria de los HPVs, y participan en la regulación de la transcripción de los oncogenes E6 y E7. Factores celulares, tales como el sistema inmune, oncogenes o antioncogenes, parecen jugar un papel importante en la carcinogénesis asociada con los HPVs.

Estudio de la subespecie II0 de la RNA polimerasa II en células de riñon de mono; elevada proporción de la subnidad II0 determinada mediante inmunodetección / Study of subespecies II0 o RNA polymerase II in monkey kidney cells; high proportion of II0 subnutrity determined by immunobloting

La RNA polimerasa II es respondable de la síntesis de RNA mensajero en organismos eucariontes. Algunas preparaciones de esta enzima presentan 3 formas llamadas II0, IIa y IIB. Utilizamos la metodología de transferencia e inmunodetección de proteínas en filtro de nitrocelulosa, para conocer la proporción d elas distintas formas de esta enzima en células de riñon de mono en cultivo (CVI). Encontramos que la subespecie II0 (con una subúnidad mayor de 240.000 d) representa una fracción importante de la RNA polimerasa II de estas células, contrario a lo comúnmnete observado en preparaciones purificadas de la enzima, en donde las subespecies IIA y IIB son mayoritarias. Mediante el empleo de la mencionada metodológia detectamos subunidades específicas de la enzima, en preparaciones de células, núcleo y cromatina "parcialmente purificada". Esto nos permitió analizar directamente la estructura de la enzima, sin utilizar los procedimientos tradicionales de purificación, los cuales resultan en una pérdida selectiva de la suespecie IIo; la enzima II0 no solo parece representar una alta proporción de la RNA polimerasa II en estas células, sino que además la encontramos asociada principalmente con la cromatina celular